2022湖南医疗卫生考试卫生法规知识点: 薄层色谱法

在天然药物中，可能包括几种或十几种化学结构和性质非常相似的化合物，如黄酮类，如果要一个一个区分开，不仅消耗人力物力，而且效果也并不理想，那有没有一种方法可以一次将他们都分开呢？当然有，那就是操作简单的薄层色谱法！

薄层色谱法是平面色谱法中应用最广泛的方法之一。具体过程如下：

1.薄层板的制备（铺板）

薄层板大小可根据实验需要选择，如载玻片、20cm×20cm玻片等。然后将固定相（又称吸附剂，常用的有硅胶、氧化铝、聚酰胺等）、黏合剂（包括羧甲基纤维素钠和煅石膏）和水按一定比例混合，研磨至均匀且无气泡，即得到固定相匀浆。将固定相匀浆涂铺在准备好的薄层板上，使整板涂布均匀。涂铺的薄层板自然晾干后，在105~110C加热30~60分钟，取出、冷却至室温。这个过程可以使硅胶吸附力增强，一般称之为“活化”。

2点样与展开

点样是薄层色谱分离的重要步骤。选择适当溶剂（甲醇、乙醇等），将试样配制成浓度为0.01%~0.1%的溶液，用点样工具（点样毛细管或微量注射器）点出直径以2~4mm为宜的圆点。采用分量多次点样，每次点样需自然干燥或用电吹风干燥后，才能二次点样。薄层色谱在展开之前进行预饱和（可消除边缘现象），随后将薄层板放入盛有展开剂的色谱缸（层析缸）中，原点不得浸入展开剂中，待展开剂前沿达一定距离（如10~20cm）时，将薄层板取出，标记溶剂前沿。薄层板选择合适的展开剂一次即能将多种化合物很好地分开！

3.斑点的定位：进行定性或定量前都必须确定组分在薄层板上的位置，定位的方式有直接目视法、显色法、紫外灯下观察荧光法、荧光淬灭法等。

整体实验结束后，我们就可以根据斑点的性质进行定性、杂质检查和定量分析：

一、定性分析

1.比移值定性：常用的方法是将试样与对照品在同一块薄层板上展开，根据试样和对照品的比移值进行比较。必要时可经过多种展开剂展开，样品的比移值与对照品比较，进一步认定该组分与对照品是否为同一化合物；

2.斑点颜色：利用斑点与显色剂反应生成的有色斑点，也可初步推断化合物的类型，通常结合比移值一起使用。

二、杂质检查

1.杂质对照品比较法：要求杂质斑点颜色不得比杂质对照品斑点颜色深。

2.主成分自身对照法：要求试样溶液中杂质斑点颜色不得比对照溶液主斑点颜色深。

三、定量分析

1.洗脱法：跑板后，选择合适的试剂将斑点中的组分洗脱下来，再用适当的方法进行定量测定。

2.目视比较法：点样后，直接用眼睛观察比较试样斑点与对照品斑点的颜色深度或面积大小，求出相似量，精密度一般为±10%。

3.薄层扫描法：用薄层扫描仪对薄层板上斑点进行扫描，通过斑点对光产生吸收的强弱进行定量分析。

综上所述，薄层色谱拥有自己独具特色的特点和用途，在今后的化学分析道路上，会有更为广阔的天空！